Culture de cellules animales
Georgia Barlovatz-Meimon, Xavier Ronot
Lavoisier
Tec et Doc
Liste des collaborateursV
Préface M. AdolpheXXV
Avant-propos G. Barlovatz-Meimon, X. RonotXXVII
Liste des abréviationsXXIX
Chapitre 1. Origine de la culture de cellules I. Freshney1
Partie I
Biologie et environnement des cellules en culture
Chapitre 2. Adhésion cellulaire A. Pierres, P. Bongrand13
Introduction13
Les interactions adhésives régulent la quasi-totalité des fonctions cellulaires13
Le comportement des cellules adhérentes dépend très significativement des propriétés physiques du substrat14
L'adhésion cellulaire repose essentiellement sur de très nombreux récepteurs membranaires spécialisés15
Méthodes d'étude de l'adhésion cellulaire : aspects généraux17
Propriétés mécaniques et/ou cinétiques de l'adhésion17
Étude morphologique de l'adhésion cellulaire20
Régulation de l'adhésion cellulaire24
Régulation de la répulsion stérique24
Régulation de l'expression des récepteurs d'adhésion24
Régulation fonctionnelle des récepteurs d'adhésion : modifications conformationnelles24
Microagrégation (clustering)24
Localisation des récepteurs sur les extrémités des protrusions membranaires25
Modification de l'interaction des récepteurs d'adhésion avec le cytosquelette d'actine25
Contrôle du détachement des cellules adhérentes25
Modifications conformationnelles25
Rupture mécanique des liaisons26
Diminution de la rigidité membranaire26
Protéolyse de molécules impliquées dans l'adhésion26
Insertion d'éléments répulsifs dans la zone d'adhésion26
Comment l'adhésion à un substrat peut-elle modifier le comportement cellulaire ?26
Signaux engendrés par l'occupation des récepteurs d'adhésion26
Regroupement de quelques molécules susceptibles d'interagir pour produire un signal27
Génération de forces et mécanotransduction à l'interface cellule-substrat27
Contrôle de l'organisation du cytosquelette28
Importance de l'étalement : effet de la forme sur le comportement cellulaire28
Conclusion29
Chapitre 3. Variabilité non génétique dans les cultures cellulaires G. Gorre, D. Stockholm, A. Paldi33
Historique33
Cellule unique et population cellulaire34
Fluctuations d'origine interne35
Bruit moléculaire : la loi des petits nombres35
Bruit structural : compartimentation subcellulaire et dynamique chromatinienne36
Stochasticité expression génique37
Fluctuations d'origine externe40
Milieu nutritif et métabolisme cellulaire40
Organisation spatiale des cellulaires in vitro40
Variations liées aux manipulations expérimentales41
Maîtriser les fluctuations42
Conclusion42
Chapitre 4. Aspects physiques des comportements collectifs épithéliaux O. Cochet-Escartin, P. Silberzan45
Structure et régulation du tissu épithélial45
Mouvements collectifs de tissus in vivo47
Étude de mouvements collectifs de tissus in vitro48
Techniques expérimentales48
Particularités du mouvement collectif50
Polarisation du mouvement collectif54
Études théoriques de la migration collective55
Modèles continus55
Modèles discrets55
Conclusion58
Chapitre 5. Défis de la culture de cellules animales en bioréacteur A. Marc, E. Guedon, E. Olmos, F. Blanchard, I. Chevalot61
Principaux réacteurs en mode agité61
Différents modes d'alimentation du milieu de culture61
Systèmes de culture placés en incubateur62
Bioréacteurs contrôlés62
Influence de l'environnement cellulaire63
Du milieu avec sérum jusqu'au milieu chimiquement défini63
Méthodes de criblage de la formulation du milieu de culture64
Éléments nutritifs solubles64
Gaz dissous65
Paramètres physicochimiques65
Culture des cellules sur microporteurs65
Différents types de supports65
Principaux paramètres opératoires65
Expansion cellulaire en système de culture agité67
Analyses et régulations en ligne sur le bioréacteur67
Mesure et régulation de la température67
Mesure et régulation de la concentration en oxygène dissous67
Mesure et régulation de la concentration en dioxyde de carbone dissous68
Mesure et régulation du pH69
Nouveaux outils d'analyse en ligne69
Analyse des cellules69
Analyse des composés solubles69
Chapitre 6. Sphéroïdes O. Oudar71
Définition, historique, intérêts, avantages71
Obtention, caractérisation des sphéroïdes72
Protocoles75
Formation des sphéroïdes75
Transfert et culture cellulaire75
Conclusion76
Chapitre 7. Dynamique du microenvironnement cellulaire A. Supiramanian, A. Cartier-Michaud, C. Charrière-Bertrand, M. Malo, G. Barlovatz-Meimon77
De la matrice extracellulaire au microenvironnement77
Le microenvironnement évolue avec le dialogue cellules/matrice78
Le « matrisome » humain79
La matrice extracellulaire, une combinatoire aux rôles pléiotropiques83
Un acteur exemplaire du dialogue cellule / matrice, la fibronectine83
La dynamique du microenvironnement constitue un système complexe86
Une dynamique particulière : le microenvironnement tumoral87
Exploration de toutes ses facettes87
Les nouveaux venus du microenvironnement : exosomes, microvésicules et autres « débris cellulaires »94
L'exemple de PAI-1, frein ou promoteur de la migration cellulaire et acteur direct de la transition mésenchymo-amaeboïde (MAT)96
Conclusion102
Annexes110
Chapitre 8. Bonnes pratiques de culture cellulaire S. Curtet-Benitski, A.-L. Filiputti-Gilquin118
Matières premières118
Cellules119
Milieux, additifs et réactifs120
Consommables121
Matériels121
Postes de sécurité microbiologique121
Incubateurs à CO2122
Centrifugeuses123
Autres équipements123
Main-d'oeuvre123
Formation du personnel123
Hygiène et sécurité124
Milieu : le laboratoire de culture cellulaire124
Niveaux de sécurité biologique et organisation124
Désinfection des locaux124
Évacuation des déchets124
Méthodes125
Conclusion126
Annexe127
Chapitre 9. Cryopréservation des cellules X. Ronot, M. Kadri, V. Martel-Frachet128
Aspects physicochimiques de la formation des cristaux128
Effets biophysiques de la formation de glace129
Déshydratation cellulaire129
Stress mécanique129
Cristallisation intracellulaire129
Choc thermique129
Effets biologiques de la formation de glace129
Agents cryoprotecteurs131
Conditions de congélation132
Matériel cellulaire132
Identification des cryotubes pour l'archivage132
Dispositifs de congélation132
Cryoconservateurs132
Congélation à-80°C133
Décongélation133
Hygiène et sécurité134
Congélation sans sérum134
Conservation de courte durée134
Transport des cellules134
Conclusion135
Annexe136
Partie II
Techniques et méthodes
Chapitre 10. Viabilité, cytotoxicité, génotoxicité A. Baeza-Squiban, K. Andréau139
Méthodes d'étude de la viabilité cellulaire140
Approches morphologiques140
Méthodes de quantification de la viabilité cellulaire140
Quantification des cellules mortes par la perte d'intégrité de la membrane plasmique143
Méthodes utilisant l'exclusion de colorants vitaux143
Méthodes utilisant la libération d'enzymes intracellulaires143
Détection couplée des cellules mortes et des cellules vivantes144
Cytotoxicité : étude spécifique des différentes voies de mort cellulaire144
Classification des différents types de mort cellulaire144
Détection et mesure spécifique de l'apoptose144
Détection et mesure spécifique de la nécrose régulée149
Détection et mesure spécifique de l'autophagie149
Méthodes d'étude de la prolifération cellulaire149
Dénombrement des cellules149
Quantification des acides nucléiques149
Incorporation d'un précurseur de l'ADN150
Mesure de l'impédance électrique cellulaire150
Étude du cycle cellulaire150
Méthodes d'étude de la génotoxicité : le test des comètes150
Conclusion151
Chapitre 11. Apport de la cytométrie en flux à la culture cellulaire J.-F. Mayol153
Principe de la cytométrie en flux153
Réseau fluidique153
Système optique153
Interface informatique155
Différents types de marquages155
Anticorps155
Sondes156
Transfection156
Compensations de fluorescence157
Interprétation des résultats157
Régions et conditionnement des graphes157
Pourcentages157
Valeurs absolues157
Intensités de fluorescence158
Applications159
Caractérisation phénotypique de sous-populations présentes159
Mesure d'une intensité de fluorescence159
Étude de la viabilité, de la mort cellulaire159
Cycle cellulaire et prolifération161
Fonctions cellulaires163
Cellules souches164
Biologie végétale164
Microbiologie, virologie165
Tri cellulaire165
Nouveaux développements165
Chapitre 12. Imagerie cellulaire J-P. Kleman, D. Grunwald168
Préservation du vivant168
Conditions de culture et maintien de l'homéostasie168
Maintien de la température169
Milieux de culture spécifiques, maintien du pH169
Stress radiatifs, stress oxydatifs170
Microscopes pour l'observation des cellules vivantes170
Principes généraux de la microscopie170
Microscopie optique172
Microscopie de fluorescence174
Dépasser les limites techniques de la résolution optique185
Chapitre 13. Transfert de gènes dans les cellules en culture P. Loyer188
Définitions et historique du transfert de gènes188
Transfert horizontal de gènes : le modèle bactérien190
Captation d'ADN par les cellules d'eucaryotes en culture190
Transfection d'ADN par des molécules polyanioniques : lipofection et polyfection191
Transfection par procédés physiques191
Transfert de gènes par infection virale : la transduction192
Plasmides et génomes viraux modifiés pour le transfert de gènes193
Transfection, transduction, oligonucléotides antisens et ARN interférence195
Applications du transfert d'acides nucléiques dans les cellules en culture195
Études de la fonction des gènes et des protéines196
Établissement de lignées cellulaires recombinantes202
Thérapie génique ex vivo205
Choix méthodologique du transfert de gènes : quels outils pour quelles applications ?205
Études de séquences régulatrices de la transcription et de la maturation des ARN206
Localisation subcellulaires de protéines et identification de leurs partenaires206
Impact de la surexpression accrue et de l'extinction de gènes sur les cellules en culture207
Établissement de lignées cellulaires recombinantes208
Chapitre 14. Méthodes informatiques en biologie G. Barlovatz-Meimon, S. Sené217
Vision globale de la bio-informatique actuelle218
Bio-informatique des séquences218
Bio-informatique des structures220
Bio-informatique des réseaux221
Traitement de l'information223
Une application traditionnelle : la phylogénie224
Réseaux et modélisation225
Modélisation théorique : le cas des réseaux d'automates226
Modélisation appliquée230
Conclusion232
Annexes235
Partie III
pharmacotoxicologie in vitro
Chapitre 15. Voies de signalisation majeures impliquées dans la survie et la prolifération cellulaire M. Guyot, G. Pagès241
Généralités sur le fonctionnement du couple ligands/récepteurs241
Différents modes de transmission du signal243
Récepteurs membranaires majeurs244
Récepteurs à activé tyrosine kinase244
Récepteurs couplés aux protéines G244
Récepteurs des cytokines couplés à la kinase JAK245
Récepteurs du Transforming Growth Factor bêta (TGFbêta)246
Voies de signalisation principales247
Voie de l'AMP cyclique (AMPc)247
Voie de la phospholipase C (PLC)247
Voie de la phosphatidylinositol-3-kinase (PI3K)248
Voies des Mitogen Activated Protein Kinases (MAPK)248
Modifications pathologiques251
Convergence, divergence et interférence entre les différentes voies de signalisation252
Conclusion252
Chapitre 16. De la cible à la molécule S. Mourah, F. Calvo255
Angiogenèse tumorale255
Mécanisme de l'angiogenèse tumorale255
« Switch » angiogénique255
Processus de l'angiogenèse tumorale256
Les facteurs VEGF et leurs récepteurs (VEGFR)257
VEGF (VEGF-A)257
Récepteurs des VEGF258
Activités biologiques du système VEGF/VEGFR258
Les anti-angiogéniques258
Objectifs de la thérapie anti-VEGF259
Bevacizumab (Avastin®)259
Partie IV
Systèmes intégrés et cultures spécialisées
Chapitre 17. Cellules souches263
Cellules souches et cellules souches embryonnaires B. Pain263
Totipotence et clonage263
Pluripotence et cellules souches embryonnaires264
Conclusion267
La niche des cellules souches : enjeux conceptuels et technologiques pour l'étude des mécanismes normaux et tumoraux V. Maguer-Satta, V. Rochet269
Concept et problématiques269
Exemple de modélisation de la niche osseuse en culture 3D au sein d'un biomatériau277
Conclusion générale et perspectives285
Chapitre 18. Ingénierie de la cornée : vers des modèles de plus en plus complexes C. Vigouroux, O. Damour, D. Aberdam, C. Auxenfans291
Modèles 3D291
Épithélium pluristratifié sans stroma291
Épithélium avec stroma (hémi-cornée)292
Cornée reconstruite complète293
Sources potentielles de cellules capables de se différencier en cellules épithéliales de cornée humaine294
Cellules souches embryonnaires humaines (hESC)294
Cellules souches pluripotentes induites humaines (hiPS)294
Chapitre 19. La peau reconstruire : un outil d'étude de pharmacotoxicologie et de création d'un modèle in vitro M. Dos Santos, A. Thepot, O. Damour, C. Auxenfans297
De la peau humaine aux équivalents cutanés : motivations ayant suscité leur développement297
Modèles simples développés pour les tests d'innocuité298
Modèles tridimensionnels et tests d'efficacité299
Peaux reconstruites dans les matrices d'origine humaine ou animale299
Peaux reconstruites dans une matrice biologique d'origine biosynthétique300
Création de modèle in vitro : exemple du vieillissement302
Modifications chimiques du support302
Modifications biologiques303
Conclusion303
Chapitre 20. Culture de cellules nerveuses J. Brocard, S. Fraboulet305
Cultures primaires de cellules nerveuses305
Phylogénie des cellules nerveuses305
Neurones du système nerveux central307
Neurones granulaires du cervelet : un modèle de migration307
Autres cellules nerveuses en culture308
Lignées cellulaires308
Différenciation de cellules souches309
Cas des cellules humaines309
Modifications de cultures matures309
Substrats et supports311
Transfection/infection312
Protocoles313
Considérations générales313
Culture de ganglions spinaux de poulet314
Culture de neurones hippocampiques ou corticaux314
Culture de neurones granulaires de cervelet315
Co-cultures à partir de neurosphères316
Transfection au phosphate de calcium317
Chapitre 21. Muscle squelettique : structure, origine et techniques de culture cellulaire F. Edom-Vovard, D. Vallese, E. Negroni, V. Mouly319
Structure et origine du muscle squelettique319
Structure du muscle squelettique adulte : les fibres musculaires319
Origine du muscle squelettique320
Cellules satellites322
Technique de culture cellulaire325
Complexité de l'organe325
Pourquoi utiliser les cultures de cellules ?325
Cultures primaires326
Lignées et immortalisation327
Fibres isolées329
Culture en trois dimensions (3D)329
Chapitre 22. Cellules cardiaques F. Rochais333
Introduction333
Structure en fonction du coeur333
Développement du coeur334
Cellule cardiaque336
Cultures de cellules cardiaques337
Quelques rappels historiques338
Isolement et culture primaire de cellules cardiaques338
Lignée cellulaires établies342
Cardiomyocytes issus de cellules souches pluripotentes343
Cultures de modèles complexes344
Culture d'explants344
Ingénierie tissulaire344
Conclusion344
Chapitre 23. Culture de cellules endothéliales : applications à l'étude de l'angiogenèse D. Vittet, S. Brouillet, P. Hoffmann, N. Alfaidy, J.-J. Feige347
Fonctions et propriétés phsysiologiques et l'endothélium vasculaire347
Angiogenèse348
Caractérisation des cellules endothéliales348
Morphologie348
Marqueurs cellulaires349
Protocoles de préparations de cultures cellulaires endothéliales (méthodes d'isolement)350
Cellules macrovasculaires. Exemple des cellules endothéliales humaines de la veine ombilicale (HUVEC)351
Cellules microvasculaires. Exemple des cellules endothéliales humaines placentaire (HPEC)352
Préparations commerciales353
Intérêt des cultures de cellules endothéliales353
Modèles 2D (bidimensionnels) d'angiogenèse353
Modèles 3D (tridimensionnels) d'angiogenèse354
Perspectives futures des cultures de cellules endothéliales357
Chapitre 24. Culture de cellules ostéoblastiques P. Marie, D. Modrowski, O. Fromigué360
Origine et différenciation des ostéoblastes360
Obtention de cellules ostéoblastiques361
Cellules provenant du stroma médullaire361
Cellules dérivées de l'os362
Autres sources de cellules de types ostéoblastique362
Ostéocytes362
Lignées cellulaires362
Utilisation des cellules ostéoblastiques363
Études phénotypiques363
Études phénotypiques ex vivo364
Applications thérapeutiques des cellules ostéoblastiques366
Analyse transcriptomique et protéomique366
Thérapie cellulaire et génique366
Conclusions et perspectives368
Chapitre 25. Système hématopoïétique M. Maynadié, F. Girodon372
Hématopoïèse372
Localisation de l'hématopoïèse372
Cellules de l'hématopoïèse372
Microenvironnement ou stroma médullaire374
Facteurs régulateurs de l'hématopoïèse375
Cultures de cellules hématopoïétiques377
Cultures et érythropoïèse377
Techniques de cultures377
Les différents types de celles cultivables378
Exemples d'application des cultures cellulaires378
Chapitre 26. Hépatocytes et foie : modèles de référence et nouvelles approches stratégiques M.-A. Robin, C. Guguen-Guillouzo382
Cultures primaires d'hépatocytes issus de parenchyme hépatique adulte383
Nécessité de déstructurer le tissu par digestion enzymatique : principe et bilan fonctionnel383
Cultures primaires en monocouche (2D)384
Modulation fonctionnelle par les facteurs environnementaux385
Obtention et différenciation d'hépatocytes à partir de cellules souches390
Cellules souches d'origine tissulaire adulte390
Cellules souches embryonnaires (ESC)390
Lignées cellulaires immortalisées et/ou transformées393
Lignées d'hépatomes issues de tumeurs393
Lignée humaine HepaRG394
Lignées d'hépatocytes immortalisées397
Innovations technologiques397
Développement de microsystèmes ou « puces » à cellules397
Cultures tridimensionnelles (3D)398
Structuration de bioréacteurs avec fluidique associée398
Applications des modèles hépatiques in vitro398
Étude des fonctions hépatiques et de leur régulation398
Étude du métabolisme et de la toxicité des xénobiotiques399
Applications thérapeutiques402
Chapitre 27. Système intestinal B. Ducarouge, M. Pelissier-Rota, M. Rolli-Derkinderen, B. Lardeux, M. Lainé, M. Neunlist, M. Jacquier-Sarlin409
Généralités sur le système digestif409
Principales populations cellulaires de l'épithélium digestif412
Cellules souches et organoïdes414
Cellules prolifératives des cryptes (cellules non transformées)416
Cellules épithéliates intestinales immortalisées418
Cellules différenciées dérivées des villosités intestinales (cellules non transformées)419
Lignées d'adénocarcinomes : modèles de la différenciation épithéliale420
Régulation des fonctions de la barrière épithéliale426
Par le mésenchyme et la matrice extracellulaire426
Par le système nerveux entérique433
Conclusion440
Chapitre 28. Cultures de cellules rénales B. L'Azou, J. Cambar448
Rappels448
Structure et fonctions du rein448
Cibles des principaux xénobiotiques451
Techniques des cultures cellulaires rénales454
Modèles rénaux in vitro complexes454
Différents types de cultures de cellules456
Cultures de cellules glomérulaires456
Cultures de cellules vasculaires corticales rénales461
Cultures de cellules tubulaires462
Cultures et complexification des modèles467
Conclusion469
Chapitre 29. Culture de cellules épithéliales respiratoires. V. Prulière-Escabasse, J. Bourbon476
Organisation et fonctions des épithéliums du tractus respiratoire chez les mammifères476
Description morphologique476
Fonctions de l'épithélium mucociliaire des voies de conduction479
Fonctions de l'épithélium alvéolaire485
Modèles de culture primaire des cellules épithéliales des voies aériennes de conduction487
Culture d'explants487
Culture de cellules dissociées487
Épithélium respiratoire humain reconstitué en xénogreffe489
Modèles de culture primaire des cellules épithéliales alvéolaires489
Isolement et purification489
Maintien des pneumocytes en culture primaire : milieux et supports de culture490
Lignées cellulaires épithéliales respiratoires493
Lignées exprimant un phénotype cellulaire des voies de conduction494
Lignées exprimant un phénotype cellulaire alvéolaire495
Dérivation in vitro de cellules épithéliales respiratoires à partir de cellules souches496
Applications des cultures de cellules épithéliales respiratoires497
Chapitre 30. Culture cellulaire de testicule et d'ovaire pour l'étude de la fonction de reproduction P. Froment, N. Quignot, A. Legendre, V. Rouiller-Fabre, G. Livera, J. Dupont, R. Habert, E. Lemazurier502
Fonction de reproduction502
Fonction testiculaire502
Fonction ovarienne508
Développement des gonades512
Cultures cellulaires testiculaires516
Modèles d'études fondamentales in vitro516
Protocoles de culture de cellules testiculaires518
Cultures cellulaires ovariennes528
Modèles cellulaires528
Protocoles de culture de cellules ovariennes529
Chapitre 31. Culture primaire de cellules pancréatiques exocrines de souris. Un outil indispensable pour la compréhension de l'étiologie de la carcinogenèse pancréatique U. Valcourt, R. M. Pommier, D. F. Vincent, L. Bartholin544
Biologie du pancréas545
Culture des cellules acineuses dispersées ou d'acini dispersés548
Isolement et culture d'acini dispersés549
Considérations générales et précautions549
Protocole550
Analyse du phénotype des cellules pancréatiques primaires555
Extraction des protéines556
Extraction des acides ribonucléiques messagers556
Analyse du phénotype des cellules557
Protocoles complémentaires d'isolement et de culture des cellules acineuses pancréatiques558
Concentration en acides aminés558
Importance du pH558
Méthode de Sphyris et al. (2005)558
Méthode de Bläuer et al. (2011) : culture organotypique559
Conclusion561
Chapitre 32. Culture de cellules de l'oreille interne de mammifère : de la physiopathologie à la thérapie F. François, S. Gaboyard-Niay, J.-L. Puel, F. Venail564
Cultures de cellules de cochlée564
Culture organotypique d'explant de cochlée565
Culture organotypique de tranche de cochlée565
Applications des cultures organotypiques de cochlée566
Cultures primaires de vestibule567
Les différentes techniques568
Applications569
Conclusion570
Chapitre 33. Caractéristiques moléculaires et propriétés fonctionnelles des cellules épithéliales mammaires A. Di-Cicco, M.-A Deugnier572
Développement de la glande mammaire572
Caractéristiques moléculaires des cellules épithéliales mammaires572
Organisation et marqueurs spécifiques de l'épithélium mammaire572
Fractionnement des cellules épithéliales mammaires et analyse par cytométrie en flux573
Interactions paracrines575
Propriétés fonctionnelles des cellules épithéliales mammaires575
Potentiel régénératif et clonogénique des cellules basales/myoépithéliales575
Activité clonogénique des cellules luminales576
Conclusion576
Chapitre 34. Système adipocytaire I. Dugail578
Fonction des adipocytes578
Modèles adipocytaires en culture579
Pré-adipocytes de la fraction stroma-vasculaire du tissu adipeux579
Lignées adipocytaires580
Conditions de culture580
Milieux de culture581
Exigences en sérum581
Repiquages581
Induction de la différenciation, contrôles de qualité582
Transfert de gènes582
Intérêt des cultures d'adipocytes582
Partie V
Autres modèles
Chapitre 35. Cultures primaires de cellules cardiaques de bivalves marins G. Dorange, M. Droguet, H. Talarmin587
Espèces cibles588
Choix du coeur589
Anatomie et structure du coeur589
Anatomie589
Structure589
Physiologie592
Cultures primaires de cellules cardiaques592
Prélèvement du coeur592
Isolement des cellules cardiaques594
Conditions de culture595
Évolution des cultures595
Croissance cellulaire597
Capacité fonctionnelle des cellules cardiaques en culture599
Essais de subculture600
Cryopréservation des cellules isolées601
Quelques exemples d'application des cultures en toxicologie602
Effet de l'acide okadaïque sur les cellules cardiaques de palourde602
Effet du tributylétain sur des cardiomyocytes d'huître603
Effet du cadmium sur les cardiomyocytes d'huître604
Conclusion604
Chapitre 36. Cultures primaires de branchies et de muscles de truite arc-en-ciel I. Leguen, J.-C. Gabillard607
Conditions de culture cellulaire pour poissons téléostéens607
Culture primaire de branchies de truite607
Isolement des cellules branchiales608
Culture sur support solide609
Culture sur support perméable609
Culture primaire de cellules satellites de truite611
Méthode d'extraction des cellules satellites de truite612
Caractérisation des cellules satellites en culture612
Chapitre 37. Enjeux fondamentaux et biotechnologiques de la culture des cellules d'arthropodes F. Cousserans, Y. Boublik, F. Salasc, M. Cerutti, T. Dupressoir615
Pourquoi cultiver des cellules d'arthropodes ?615
Génomique structurale615
Génomique fonctionnelle615
Modèles animaux616
La culture de cellules d'arthropodes existe depuis le début du 20e siècle616
Culture de cellules d'arthropodes et agents infectieux616
« Montée en puissance » des cultures de cellules d'arthropodes617
Spécificités techniques618
Production de protéines hétérologues et/ ou recombinantes620
Les différents systèmes620
« Humanisation » des systèmes de production de protéines recombinantes en cellules d'insecte623
Glycosylation dans les cellules d'insecte623
« Humanisation » de la voie de biosynthèse des N-glycanes624
Perspectives626
Production de particules virales627
Vaccins627
Vecteurs629
Conclusion630
Partie VI
Législation
Chapitre 38. Aspects éthiques et réglementaires de l'utilisation des cellules, tissus et produits du corps humain : applications aux études in vitro I. Fabre, A. De Guerra639
Législation : historique des lois relatives à la bioéthique639
Les premières lois de bioéthique639
Sanctions en cas d'infractions en matière d'éthique médicale641
Organes641
Prélèvement à fins scientifiques sur personnes décédées642
Tissus, cellules, produits du corps humain et dérivés642
Dispositions communes642
Prélèvement et collecte642
Autorisation des établissements effectuant les prélèvements643
Préparation, conservation en utilisation des tissus, des cellules et de leurs dérivés643
Recherche sur l'embryon et les cellules souches embryonnaires644
Autres modèles cellulaires prospectifs issus d'éléments du corps humain : un cadre législatif moins contraignant644
Cellules souches adultes644
Cellules souches pluripotentes induites645
Textes relatifs à l'importation et à l'exportation d'organes, de tissus et de cellules du corps humain645
Pour les organes645
Pour les tissus, cellules645
Brevetabilité des éléments du corps humain et de ses dérivés646
Directive européenne relative à la protection juridique des inventions biotechnologiques646
Encadrement juridique communautaire et international dans les différents domaines de la bioéthique646
Droit communautaire646
Droit international647
Conclusion647
Postface - Considérations éthiques sur l'usage futur des cultures cellulaires J. Demongeot649
Index663