Méthodes en immunologie
Des principes aux bonnes applications
2e édition
Marie Christine Béné
Christian Drouet
Sylvain Fisson
Sylvie Fournel
Estelle Seillès
Elsevier Masson
Liste des collaborateurs
IX
Avant-propos
XIII
Abréviations
XV
Introduction générale
XIX
I
Techniques immunologiques
Chapitre 1
L'antigène comme réactif : définition et propriétés
3
Caractéristiques des antigènes3
Nature chimique, origine et localisation des antigènes3
Thermodynamique de la réaction antigène-anticorps4
Qualité de l'antigène et interactions antigène-récepteur5
Propriétés des antigènes influant sur les méthodes de dosage5
Autres facteurs conditionnant l'interaction antigène-récepteur5
Particularités des allergènes8
Chapitre 2
Les anticorps comme réactifs et outils thérapeutiques
11
Rappels sur les anticorps11
Préparation d'anticorps polyclonaux12
Préparation d'anticorps monoclonaux15
Ingénierie moléculaire des anticorps18
Fragments d'anticorps recombinants (18). Fragments d'anticorps recombinants solubles (18). Fragments d'anticorps recombinants Intracellulaires (18). Fragments d'anticorps recombinants multivalents, multispécifiques ou multifonctionnels (21). Fragments d'anticorps à domaine unique (22). Fragments d'anticorps exprimés à la surface d'un bactériophage (22). Anticorps chimériques (23). Anticorps humanisés (23). Anticorps humains (24).
Applications des anticorps monoclonaux24
Conservation des anticorps25
Chapitre 3
Techniques sans traceur
27
Immunoprécipitation27
Immunodiffusion29
Immunochromatographie33
Mesure d'affinité par résonance plasmonique de surface35
Agglutination immunologique38
Mise à profit des capacités cytotoxiques du complément41
Chapitre 4
Techniques avec traceurs
43
Types de traceurs43
Les enzymes comme traceurs (43). Les fluorochromes comme traceurs (47). Les radio-isotopes comme traceurs (48).
Dosages immuno-enzymatiques (ELISA) ou immuno-fluorescents (FLISA)49
Des dosages radio-immunologiques (RIA) à la spectrométrie de masse53
Dosages radio-immunologiques (53). Spectrométrie de masse (54).
Immunodosages multiplexes57
Immuno-empreinte/Western blot60
Immunofixation63
Puces à protéines (protein arrays)63
Cytométrie en flux65
Marquages cellulaires et tissulaires, immunocytologie et immunohistologie73
Puce tissulaire (tissue microarray)77
EliSpot et FluoroSpot79
Chapitre 5
Techniques de biologie moléculaire
83
Techniques d'amplification utilisées en immunologie83
Réaction de polymérisation en chaîne (83). RT-PCR (85). qRT-PCR ou RT-PCR quantitative (85). Génotypage par PCR-SSO, PCR-SSP et PCR-SBT (87). Immuno-PCR (89). Avantages/inconvénients (90).
Méthodes de séquençage91
Diagnostic de clonalité, analyse du répertoire92
Puces à ADN (DNA microarrays)96
Principe (96). Hybridation génomique comparative sur puce (CGH array) (97).
Transcriptomique100
Transfections cellulaires d'ADN102
Transfection d'ARN104
Modification du génome : CRISPR-Cas9104
Protéomique105
Protéomique conventionnelle (106). Protéomique et imagerie MALDI (110).
Chapitre 6
Tests cellulaires
115
Étude cytologique des cellules immunitaires115
Immunophénotypage118
Séparation et tri cellulaire119
Techniques de séparation par densité (120). Techniques de séparation en phase solide (121). Tri cellulaire par cytométrie en flux (122).
Culture cellulaire et co-cultures124
Prolifération cellulaire126
Cytotoxicité, fonction cytotoxique des lymphocytes T CD8+ et des cellules NK130
Apoptose134
Évaluation de l'altération des membranes plasmiques liée à l'apoptose (136). Mesure des modifications mitochondriales liées à l'apoptose (138). Mesure de l'activation des caspases (138). Étude de la fragmentation de l'ADN (140). Avantages/inconvénients (141). Exemples d'applications (141).
Autophagie et système immunitaire141
Autophagie (141). Monitoring de l'activité autophagique (143). Xénophagie (147). Monitoring des conséquences cellulaires de la dérégulation de l'autophagie (149).
Suppression150
Phagocytose153
Phagocytose conventionnelle (153). Phagocytose assistée par LC3 (155).
Bactéricidie156
Métabolisme oxydatif157
Dégranulation162
Migration cellulaire/adhérence164
Tests phénotypiques ou génotypiques classiques (165). Tests fonctionnels classiques (165). Tests quantitatifs par méthodes physiques (167). Tests fonctionnels des intégrines en cytométrie en flux : les anticorps conformationnels (169).
Chapitre 7
Modèles et tests in vivo
171
Pertinence des modèles animaux171
Les différentes espèces utilisées (171). Points clés des modèles souris (172). Différents types de lignées de souris (172). Aspects éthiques et législatifs (174).
Transgenèse, KO-KI174
Transgenèse additionnelle (174). KO ou Kl (175). cKO (178). Knockdown géniques (178).
Autres modèles animaux : Danio rerio, Drosophila melanogaster et Caenorhabditis elegans179
Danio rerio (zebrafish) (179). Modèles Invertébrés : Drosophila melanogaster (Drosophile) et Caenorhabditis elegans (182).
Tests cutanés184
II
Exemples d'applications
Chapitre 8
Exploration du complément
191
Dosage hémolytique du complément191
Dosage des fractions du complément192
Exploration des récepteurs du complément195
Exploration des produits de clivage des protéines du complément196
Chapitre 9
Exploration des immunoglobulines
199
Immunoglobulines monoclonales : méthodes diagnostiques199
Recherche d'anticorps spécifiques209
Chapitre 10
Exploration de pathologies impliquant le complément
213
Syndrome hémolytique et urémique atypique213
Angio-oedème à kinines214
Chapitre 11
Détection/dosage des cytokines et de leurs récepteurs
217
Chapitre 12
Exploration du complexe majeur d'histocompatibilité
225
Réactions cellulaires226
Tétramères CMH-peptides226
Exemples d'applications226
Chapitre 13
Hypermutations somatiques et translocations chromosomiques
227
Hypermutations somatiques227
Translocations chromosomiques229
Chapitre 14
Immunohématologie
231
Techniques sérologiques par hémagglutination234
Hémagglutination directe (235). Hémagglutination indirecte (235). Techniques en microplaques (235). Hémagglutination en tube (235).
Alternatives à l'hémagglutination235
Immuno-adhérence (235). Génotypage (236). Autres techniques (237).
Chapitre 15
Immunoinformatique
239
IMGT®239
Approche génomique (239). Approche génétique (239). Approche structurale (240). IMGT/mAb-DB (240).
IMGT-ONTOLOGY241
Identification (242). Classification (242). Description (242). Numérotation (242).
Exemples d'outils IMGT®244
IMGT/V-QUEST (244). IMGT/HighV-QUEST (244). IMGT/DomainGapAlign (245). IMGT/Collier-de-Perles (245).
IMGT/3Dstructure-DB245
Index
247